基于Mass Spectrum检测的AAE方法分析HCP – 更清楚和更真实了解工艺中HCP的残留情况

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为什么要验证HCP抗体覆盖率

 

在对工艺中HCP(宿主细胞蛋白)的监控和产品放行中,ELISA一直被用作HCP检测的金标准。这主要是因为ELISA可以在mg/ml级别的产品蛋白中有效地检测ng/ml级别的HCP残留。并且ELISA的操作简便,是经典的免疫学检测方法。ELISA检测HCP也有方法的局限性,比如不能从ELISA的结果中知道样品中有哪些HCP,或者用于ELISA检测的抗体与哪些HCP发生了免疫反应。因此,监管部门要求在使用ELISA检测过程中HCP残留含量时,不仅要通过方法学验证证明试剂盒的准确度,精密度,灵敏度等,而且还需要证明使用的HCP抗体有广泛的反应性,即HCP抗体覆盖率。

 

 


夹心法HCP ELISA工作原理



 

AAE是检测HCP抗体覆盖率的更有效方法

 

2014年,作为过程污染物残留检测产品领先开发商,Cygnus结合多年HCP抗体及试剂盒开发经验,推出了Affinity Antibody Extraction(AAE)方法验证覆盖率,突破了传统2DWB方法验证覆盖率的局限性,更真实准确反应HCP抗体覆盖率。AAE提取富集的样品和未经AAE提取的样品分别经过2D PAGE分离后使用银染的方法对得到的点进行匹配、计数、计算覆盖率。这种方法一经上市后,广泛得到生物制药企业和监控部门的认可。

 


AAE和银染验证HCP抗体覆盖率原理


 

AAE+MS更清晰地展示了工艺中HCP残留情况,进一步对产品质量安全做风险评估

 

现阶段,常用的HCP抗体覆盖率验证的方法都存在其自身的局限性。AAE方法解决了传统2DWB中的低灵敏度和低特异性的问题。而且,由于AAE可以在富集本身含量较低的HCP的同时,还可以大幅降低中间品和终产品中的药物蛋白。这使对中间品和终产品中HCP与HCP抗体的反应情况的分析成为可能。尽管如此,AAE和银染分析也不能具体得知样品中具体有哪些种类的HCP,尤其是那些与人体有较高免疫原性和对药物有较大影响的HCP。基于以上问题的考虑,Cygnus利用更精准的质谱检测方法与AAE相结合,推出了新一代的AAE和Mass Spectrum覆盖率验证服务。


AAE和Mass Spectrum验证HCP抗体覆盖率工作流程

 

 

 

AAE与Mass Spectrum可对上游和下游工艺中的样品进行分析,覆盖率的结果更高、更真实。更主要的是质谱可以对样品中是否存在潜在高风险的HCP做出鉴定并提供这些蛋白相关含量,分子量,等电点等信息。无论是药物研发人员,还是监管人员都可以对某个工艺中HCP残留情况有清楚的了解,从而做出更好的判断。

 

 

北京西美杰科技有限公司是美国Cygnus Technologies公司中国区总代理,负责销售Cygnus全线产品以及覆盖率验证,专属试剂盒定制等服务,并提供产品和服务售前和售后技术支持、服务样品寄送、进度跟踪、服务报告整理等一站式服务。如感兴趣请拨打西美杰热线电话:400-050-4006。



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